Testovanie PCR (polymerázová reťazová reakcia) je základnou technológiou v molekulárnej diagnostike. Štandardizácia jeho procesov balenia a testovania priamo ovplyvňuje presnosť a biologickú bezpečnosť výsledkov. Tento článok poskytuje profesionálny pohľad na kľúčové body kontroly kvality počas procesu testovania PCR.
Ukážky a predbežné ošetrenie sú prvými krokmi v procese. Laboratóriá musia striktne overovať identifikáciu vzorky, podmienky prepravy a čas skladovania, aby sa zabezpečila integrita vzorky. Po prijatí musia byť vzorky očíslované a zaregistrované v biologickej bezpečnosti a podstúpiť pred - postupy spracovania, ako je lýza a extrakcia nukleových kyselín na základe typu testu. V tejto fáze je potrebný systém overovania osoby s dvoma -, aby sa zabránilo kontaminácii Cross -.
Príprava reakčného systému PCR sa musí vykonávať v čistej lavičke. Prevádzkovatelia musia nosiť ochranné vybavenie úrovne 3 a používať nukleázu - bezplatné spotrebné materiály. Príprava činidla dodržiava princíp „jednosmerného pracovného postupu“, ktorý sa pohybuje od oblasti prípravy činidla do oblasti spracovania vzorky a potom do oblasti zosilnenia. Do každej reakčnej dávky musia byť zahrnuté negatívne kontroly, pozitívne kontroly a vnútorné kontroly, aby sa monitorovala experimentálna platnosť.
Počas fázy amplifikácie a testovania musí byť prístroj PCR pred - overenými kalibrovanými a teplotnými cyklistickými parametrami. Reakčný postup zvyčajne obsahuje tri kroky: denaturácia (94 - 95 stupňov), žíhanie (50-65 stupňov) a rozšírenie (72 stupňov). Počet cyklov je upravený na základe detekčného cieľa. Fluorescencia PCR v reálnom čase tiež vyžaduje monitorovanie prahu fluorescenčného signálu špecifických kanálov.
Analýza výsledkov a podávanie správ musia vykonávať kvalifikovaní technici. Surové údaje musia byť preskúmané najmenej dvoma odborníkmi, aby sa potvrdila morfológia krivky zosilnenia, hodnovernosť hodnoty CT a dodržiavanie materiálov na kontrolu kvality s normami. Záverečná správa by mala obsahovať informácie o metodike testovania, základ pre interpretáciu výsledkov a výrok o obmedzeniach testu.
Celý proces prísne dodržiava ISO 15189 a príslušné špecifikácie CDC. Zabezpečenie spoľahlivosti a sledovateľnosti testovania PCR sa implementuje systém trojitého záruk na monitorovanie životného prostredia, údržbu zariadení a školenie personálu.